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標簽：Elisa 抗體 標準品 緩沖液 本生試劑盒 裂解液 蛋白酶
在ELISA檢測中，固體樣本(如組織、糞便、植物、食品等)需要經(jīng)過適當處理，以釋放目標分子(如蛋白質(zhì)、抗原或抗體)并消除干擾物質(zhì)。以下是 固體樣本處理的常用方法及步驟：
一、固體樣本處理通用流程
1. 樣本收集與保存
快速處理：避免樣本降解(如組織樣本離體后盡快冷凍或液氮保存)。
儲存條件：-80℃長期保存，避免反復凍融。
2. 樣本均質(zhì)化
通過物理或化學方法破碎細胞/組織，釋放目標分子：
機械破碎：
液氮研磨(適用于組織、植物)
勻漿器/超聲破碎(適用于軟組織、細菌)
珠磨法(適用于堅硬樣本如種子、糞便)
酶解法：
使用蛋白酶K、溶菌酶等(適用于微生物或含細胞壁的樣本)。
3. 裂解緩沖液選擇
根據(jù)目標分子性質(zhì)選擇裂解液：
RIPA緩沖液(通用型，含去垢劑如Triton X-100、SDS)
PBS/TBS緩沖液(溫和裂解，適用于可溶性蛋白)
特殊緩沖液：
含EDTA(抑制金屬蛋白酶)
含蛋白酶抑制劑(防止蛋白降解)
4. 離心去雜質(zhì)
低溫離心(4℃，10,000–15,000 ×g，10–15分鐘)去除細胞碎片、不溶物。
取上清用于ELISA檢測(避免吸取沉淀)。
5. 蛋白濃度測定與標準化
用BCA/Bradford法測定總蛋白濃度，調(diào)整至統(tǒng)一濃度(如1–2 mg/mL)，避免檢測偏差。
6. 干擾物去除(可選)
脂質(zhì)干擾：有機溶劑(如丙酮)沉淀或脂質(zhì)吸附劑處理。
多糖/酚類干擾(植物樣本)：PVPP(聚乙烯聚吡咯烷酮)吸附。
內(nèi)源性酶干擾：加熱滅活或添加抑制劑(如HRP樣本避免辣根過氧化物酶干擾)。
二、常見固體樣本處理示例
1. 動物組織(如肝臟、腫瘤)
步驟：
液氮速凍，研磨成粉末。
加入RIPA裂解液(含蛋白酶抑制劑)，冰上裂解30分鐘。
離心取上清，測定蛋白濃度后稀釋至相同濃度。
2. 植物葉片
步驟：
液氮研磨后，加入PVP(去除多酚)和Tris-HCl緩沖液(pH 8.0)。
離心后取上清，必要時透析去除色素。
3. 糞便樣本
步驟：
懸浮于PBS(如1:10 w/v)，渦旋混勻。
離心去除大顆粒，上清過濾(0.22 μm)或進一步純化(如PEG沉淀病毒)。
4. 食品(如肉類、谷物)
步驟：
均質(zhì)化后，用PBS或?qū)Ｓ锰崛【彌_液(如食品過敏原檢測試劑盒配套緩沖液)提取。
離心后取上清，必要時脫脂(正己烷洗滌)。
三、注意事項
避免過度裂解：可能導致目標蛋白降解或非特異性結(jié)合。
對照設(shè)置：
陰性對照：裂解緩沖液空白。
陽性對照：已知濃度標準品。
樣本稀釋：若信號過強，需用裂解緩沖液稀釋后重測。
批次一致性：同一實驗使用相同處理條件的樣本。
四、優(yōu)化方向
預實驗：測試不同裂解液和離心條件，選擇最佳回收率。
試劑盒兼容性：某些ELISA試劑盒提供專用樣本處理緩沖液(如糞便DNA/RNA保存液)。
通過規(guī)范化的固體樣本處理，可顯著提高ELISA檢測的準確性和重復性!
注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師或品牌供應商。
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