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小鼠單抗 Ig 類/亞類鑒定用 ELISA 試劑盒使用說(shuō)明書(shū) 天津本生
試劑原理:本試劑盒利用雙抗體夾心法鑒定小鼠淋巴細(xì)胞雜交瘤培養(yǎng)上清中單克降抗體或特異親和純化的單克隆抗體的類和亞類(可區(qū)分出IgG1\IgG2aIgG2bIgG3IgMgA)采用小鼠抗體共有位點(diǎn)的二抗包被微孔板，與加入的培養(yǎng)上清中的小鼠抗體結(jié)合，再加入HRP標(biāo)記的抗小鼠各類、亞類的抗體來(lái)分別反應(yīng)，最后用 TMB 底物系統(tǒng)顯色并用稀硫酸終止，再通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度來(lái)判斷被測(cè)單克降抗體的類或亞類。本試劑盒具的分辨率，是您鑒定小鼠單克隆抗體類、亞類的可靠工具。
二、組成成分:
酶標(biāo)板含自封袋2個(gè)2x96 孔
標(biāo)本稀釋液15m1通用陽(yáng)性對(duì)照1.8ml
顯色劑A15m1
通用陰性對(duì)照1.8ml
顯色劑 B15m1
酶標(biāo)二抗6種
6x4m1反應(yīng)終止液
15m120x清洗液
50mL加樣圖2份
封板膜4 張說(shuō)明書(shū)1份
三、使用范圍:用于培養(yǎng)上清中小鼠單克隆抗體Ig類、亞類的鑒定以及相關(guān)內(nèi)容的研究。
四、使用方法:
1、首先將試劑盒恢復(fù)室溫(大約 30分)，然后用純水把清洗液配成工作濃度(一份濃縮清洗液加 19 份純水 )。
2、取出酶標(biāo)板。每個(gè)標(biāo)本需要6孔，陽(yáng)性對(duì)照6孔，陰性對(duì)照6孔。多余的用自封袋保存，記得放入干燥劑。
3、將標(biāo)本檢測(cè)孔每孔先加入標(biāo)本稀釋液各 5041。然后將5041細(xì)胞培養(yǎng)上清(或特異親和純化的抗體)再加入酶標(biāo)微孔板，每個(gè)標(biāo)本加6孔;陽(yáng)性對(duì)照和明性對(duì)照孔不加標(biāo)本稀釋液也是各加 6孔每孔 10041。貼上封板膜 37℃溫育30分鐘。
4、棄去板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機(jī)洗5遍。再在每個(gè)標(biāo)本的6孔中分別加入6種酶標(biāo)二抗各 100%1，通用陽(yáng)性、陰性對(duì)照的各孔也一樣。在加樣圖上或酶標(biāo)板上做好標(biāo)記。貼上封板膜 37℃溫育30分鐘。
5、吸棄板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機(jī)洗5遍。每孔分別加入顯色劑A和顯色劑B各 5041，換一張新的封板膜貼板避光 37℃顯色 20分鐘。
6、本試劑盒特異性好一般肉眼即可觀察出結(jié)果，看顯色藍(lán)的那個(gè)孔所對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)二抗就知道此標(biāo)本的Ig類或亞類。更可將反應(yīng)終止液(每孔5041)終止反應(yīng)后用酶標(biāo)儀450mm測(cè)定波長(zhǎng)，630mm參考波長(zhǎng)雙波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果，參看高值孔所對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)二抗就知道此標(biāo)本的 Ig類或亞類(陽(yáng)性對(duì)照0D一般不小于 0.8，陰性對(duì)照一般不高于0.15，陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn):樣品 OD 大于陰性0D10.15，陰性0D低于0.05按0.05算)。
五、產(chǎn)品特點(diǎn):高靈敏度、高特異性、結(jié)果容易判定。
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